Determinacion Y Comportamiento De La Actividad Enzimatica

DETERMINACION Y COMPORTAMIENTO DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA DE LA CATALASA EN PRECENCIA DE DIFERENTES CONCENTRACIONES DEL SUSTRATO
III SEMESTRE
FACULTAD DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL
UNIVERSIDAD DE NARIÑO


RESUMEN
Se determino la actividad enzimática de la catalasa en una muestra de sangre fresca, variando condiciones de concentración del sustrato, se prepararon 11 tubos de ensayo conmezclas de reactivos diferentes y en orden para cada uno de los tubos, entre ellos encontramos el cianuro de potasio lo cual inhibe la enzima en la reacción del tubo 4 luego la enzima catalasa se calentó por 10 minutos y posteriormente enfriar otro tubo con catalasa junto a los 11 tubos de ensayo hasta alcanzar a una temperatura de 4°C, utilizamos acido sulfúrico (H2SO4) el cual es un desnaturalizantede proteínas, y por último el titulando con permanganato de potasio (KMnO4) donde se obtuvieron volúmenes que fueron necesarios para calcular las variables finales necesarias para el estudio de la cinética como son afinidad por el sustrato (Km) y velocidad máxima (Vmax.)

INTRODUCCION
Las enzimas son proteínas con capacidad de catalizar reacciones biológicas. Aumentan la velocidad paraalcanzar el equilibrio de la reacción. El mecanismo por el cual las enzimas incrementan la velocidad de la reacción sin afectar la constante de equilibrio. La cinética enzimática es la que proporciona información de las velocidades de reacción con una enzima y la forma en que cambia en respuesta a cambios en los parámetros experimentales, miden también la afinidad de las enzimas por los sustratos y losinhibidores . Es importante destacar que uno factores clave que afecta a la velocidad de una reacción catalizada por una enzima es la cantidad de sustrato presente. Pero el estudio de los efectos de la concentración de sustrato es complicado debido al hecho de que la concentración de sustrato cambia durante el transcurso de una reacción a medida que el sustrato se convierte en producto. Laimportancia del estudio de la cinética enzimática reside en dos principios básicos. En primer lugar, permite explicar cómo funciona una enzima, y en segundo lugar, permite predecir cómo se comportará esa enzima. Las constantes cinéticas, Km y Vmax, son los pilares fundamentales a la hora de intentar comprender el funcionamiento de las enzimas en el control del metabolismo .

METODOLOGIA
Para estelaboratorio fueron necesarios la temperatura de 92ºC aproximadamente a la que fue sometida la enzima catalasa durante un tiempo de 10 minutos, luego pasamos la enzima a un recipiente con agua-hielo con el fin de bajar su temperatura a 4ºC y así poder determinar y cuantificar con más exactitud las variables. Luego se prepararon 11 tubos con diferente concentración del sustrato y con diferentesreactivos observados en la tabla 1.
Posteriormente se someter los 11 tubos a un recipiente con agua-hielo junto con la catalasa de 10 ml y que lleguen a una temperatura de 4ºC se adiciona en frio la catalasa a cada uno de los tubos excepto el tubo 3 el cual contiene la catalasa calentada y de inmediato adicionamos acido sulfúrico (H2SO4) 0.09M 1mL para cada tubo, batimos cada tubo en un tiempo de 7minutos en total aproximadamente, luego de este proceso se inicia el titulando con permanganato de potasio (KMnO4) 0.002M lo cual en este proceso el permanganato de potasio debe tomar una coloración rosada lo que demuestra el final de la titulación con el fin de determinas la cantidad de sustrato que no fue trasformada, y recopilar los volúmenes que fueron utilizados para cada tubo.RESULTADOS
Mezcla de reactivos para cada tubo
Tabla 1
Tubo B 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
Buffer pH 7 (mL) 3 3 3 3 5 4 3 2 1 0.5
Buffer pH 6 (mL) 3
Buffer pH 8 (mL) 3
Sustrato H2O2 4 4 4 4 4 4 2 3 4 5 6 6.5
H2SO4 6N (mL) 1 1
KCN gotas 5
Catalasa Calentada (mL) 1
Catalasa (mL) 1 1...