Determinacion de la actividad enzimatica de la peroxidasa

UNIVERSIDAD INDUSTRIAL DE SANTANDER
FACULDA DE CIENCIAS BÁSICAS
ESCUALA DE QUÍMICA
LABORATÓRIO DE BIOQUÍMICA

DETERMINACION DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA DE LA PEROXIDASA
EXTRAIDA DE HOJAS DE PLANTA (PALMA AFRICANA).

Resumen

En la presente práctica se llevo a cavo la extracción de la hoja de palma (palma africana) una solución enzimática de peroxidasa, a la cual se le sometió a unestudio cinético-enzimático mediante el cambio de absorbancia con el tiempo. Esto se llevo a cavo mediante diferentes concentraciones de enzima, que permitieron la determinación de la actividad enzimática de la peroxidasa.


Introducción

En Bioquímica, se llaman enzimas las sustancias de naturaleza proteica que catalizan reacciones químicas, siempre que sea termodinámicamente posible (si bienno pueden hacer que el proceso sea más termodinámicamente favorable). En estas reacciones, las moléculas sobre las que actúa la enzima en el comienzo del proceso son llamadas sustratos, y estas los convierten en diferentes moléculas, los productos.

Existen diversos métodos para medir la velocidad de una reacción enzimática. La espectrofotometría permite detectar cambios en la absorbancia de luzpor parte del sustrato o del producto (según la concentración de estos) y la radiometría implica incorporación o liberación de radiactividad para medir la cantidad de producto obtenido por tiempo. Los ensayos espectrofotométricos son los más utilizados, ya que permiten medir la velocidad de la reacción de forma continua. Por el contrario, los ensayos radiométricos requieren retirar las muestraspara medirlas, por lo que son ensayos discontinuos. Sin embargo, estos ensayos son extremadamente sensibles y permiten detectar niveles muy bajos de actividad enzimática.

Como todos los catalizadores, las enzimas funcionan disminuyendo la energía de activación (ΔG‡) de una reacción, de forma que se acelera sustancialmente la tasa de reacción. Las enzimas no alteran el balance energético de lasreacciones en que intervienen, ni modifican, por lo tanto, el equilibrio de la reacción, pero consiguen acelerar el proceso incluso millones de veces. Una reacción que se produce bajo el control de una enzima, o de un catalizador en general, alcanza el equilibrio mucho más deprisa que la correspondiente reacción no catalizada.

Al igual que ocurre con otros catalizadores, las enzimas no sonconsumidas por las reacciones que catalizan, ni alteran su equilibrio químico. Sin embargo, las enzimas difieren de otros catalizadores por ser más específicas.

La peroxidasa es una enzima que cataliza la oxidación de un amplio número de sustratos orgánicos e inorgánicos, utilizando el poder oxidante del peróxido de hidrógeno (el cual es el sustrato). Es utilizada ampliamente en bioquímica clínica.Así, los ensayos para la determinación y cuantificación de metabolitos como glucosa, ácido úrico, colesterol o triglicéridos en fluidos biológicos usan peroxidasa como enzima acoplada. También se utiliza en inmuno ensayos para la detección de virus tan conocidos como el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) causante del SIDA o el herpes virus. La peroxidasa también se utiliza comobiocatalizador para la generación de productos de interés biotecnológico e industrial como resinas fenólicas, adhesivos, antioxidantes, antiestáticos y protectores de radiación magnética, colorantes alimentarios y componentes bioactivos de detergentes. En este experimento, para analizar la actividad de la enzima se utilizara la solución extraída de la planta y reaccionara con soluciones de H2O2. La enzimadescompondrá el peróxido produciendo O2 libre que reaccionara con un compuesto (Guayacol) que al oxidarse forma una solución coloreada (Tetraguayacol) y de esta forma poder ser detectado a una longitud de onda en el rango visible.

Objetivo

Extracción de una solución enzimática de la palma africana, la cual se sometió a catalizar una solución de peróxido de hidrogeno que oxida el guayacol a...