PCR convencional

INFORME DE LABORATORIO

PCR





BIOLOGÍA MOLECULAR





UNIVERSIDAD DEL QUINDÍO
INFORME DE LABORATORIO
PCR

En este laboratorio recibimos una charla en el laboratorio deBiomédicas, acerca de las características y fundamentos básicos del PCR ( Reacción en cadena polimerasa) convencional.
La PCR es una herramienta útil en el diagnóstico clínico. A partir del PCR voy aobtener muchas copiamos de un ADN determinado, el cual yo quiero amplificar o quiero detectar.
Para realizar la PCR se necesitan unos reactivos fundamentales, los cuales son: la cadena molde, la Taqpolimerasa, agua estéril, primers, Buffers, DNTPs y el cloruro de magnesio.
Lac cadena molde se debe aislar previamente, y es la que vamos a amplificar durante el procedimiento.
La Taq polimerasa es laenzima que me va a unir los nucleótidos complementarios a la cadena molde luego de ser separada esta misma. Esta enzima es termoestable, y permite un óptimo funcionamiento a altas temperaturas.
Losprimers son los marcadores, que me indican donde debe iniciar la replicación y la acción e la Taq polimerasa. Estos son específicos para cada gen, y pueden ser sintetizados dependiendo de lo queestemos buscando, y también podemos determinar cómo se va a comportar durante de la reacción. Esto se hace teniendo en cuenta el gen que vamos a buscar. Siempre se utilizan primers que van de 5´a 3´, yde 3´a 5´, además estos me determinan la especificidad de la reacción.
El cloruro de magnesio actúa como un cofactor de la acción de la Taq polimerasa, ya que potencia su acción y mejora sufuncionamiento
La solución buffer me permite mantener PH estable durante la reacción.
El agua estéril me permite mantener el volumen esperado, aproximadamente de 25 ml, necesarios en la reacción.
Todosestos elementos o reactivos están mezclados en un tubo de PCR a volúmenes y concentraciones estándar. Esto se realiza en un tubo en la cámara de flujo laminar, donde están así condiciones estériles...