Hplc

FACULTAD DE CIENCIAS

ESCUELA DE BIOQUIMICA Y FARMACIA

Análisis instrumental i
VALIDACIÓN DE MÉTODOS HPLC
TEMA: Validación del método analítico para la determinación de 3 vitaminas hidrosolubles en un suplemento vitamínico

Integrantes:
GRUPO 10
* marcelo castellano 2222
* alexandra trujillo 1741
* carolina trujillo 1829
* luis villaroel

nivel: quinto “a”fecha de entrega: 09 de mayo 2012
TEMA: Validación del método analítico para la determinación de 3 vitaminas hidrosolubles en un suplemento vitamínico
CONTENIDO:
RESUMEN
Se presentan los resultados obtenidos en la validación de un método analítico por cromatografía líquida de alta resolución, para la determinación de tiamina mononitrato, piridoxina clorhidrato y nicotinamida en el suplementonutricional neovitamin II, el cual se diseñó para separar las vitaminas entre sí, con la utilización de una columna RP-18 de 25 cm y un detector UV-Visible. Dicho método se empleó para el control de la calidad y la estabilidad de este producto. El método fue validado siguiendo una metodología de trabajo elaborada previamente en un Protocolo de Validación, donde se analizaron diferentes parámetroscomo son: linealidad, exactitud, precisión, selectividad, límites de detección y cuantificación, adecuación del sistema y estabilidad de las soluciones. Se obtuvieron resultados satisfactorios y se comprobó de esta forma la validez del método analítico.
El neovitamin II es un suplemento multivitamínico esencial como requerimiento nutricional para un crecimiento normal del organismo humano, esadministrado fundamentalmente a embarazadas, ancianos y pacientes que presenten estados hipovitamínicos. Está constituido por tiamina mononitrato (3,85 mg), nicotinamida (22 mg), piridoxina clorhidrato (2,5 mg), riboflavina (1,84 mg), ácido fólico (0,325 mg), vitamina A palmitato (32,5 mg) y cianocobalamina (0,072 mg).
Una de las grandes dificultades en el desarrollo de técnicas analíticas paracomplejos vitamínicos es contar con métodos específicos, principalmente si los métodos a utilizar se emplearan en estudios de estabilidad.
Aparecen por primera vez reportadas en la Farmacopea de los Estados Unidos Edición 23, técnicas oficiales para suplementos nutricionales, de manera que se determinan las vitaminas por cromatografía líquida de alta resolución, simultáneamente con el resto de lasvitaminas hidrosolubles.
El objetivo del presente trabajo es demostrar la validez del método analítico desarrollado en el Departamento de Productos Naturales del Centro de Investigaciones y Desarrollo de Medica-mentos (CIDEM) para la determinación de las vitaminas hidrosolubles: tiamina mononitrato, piridoxina clorhidrato y nicotinamida presentes en el neovitamin II. Para ello se seleccionaron unaserie de parámetros a determinar, como son: linealidad, exactitud, precisión, selectividad, límites de detección y cuantificación, adecuación del sistema y estabilidad de las soluciones.
TIPOS DE MÉTODOS ANALÍTICOS
Todas las determinaciones se realizaron en un cromatógrafo líquido de alta resolución equipado con una columna de fase reversa LiChrosorb RP-18, de 25 cm de longitud, un detector UV-Visa una longitud de onda de 280 nm, un flujo de alrededor de 1 mL/min y un loop de 20 µL.Entre los reactivos y soluciones utilizados se encuentran agua purificada, buffer de hidrógeno fosfato de potasio 0,03 mol/L y pH 2,7 la fase móvil buffer-metanol (99-1) y las soluciones de referencia de cada vitamina: 
* Estándar de tiamina mononitrato: se pesó con exactitud 38,5 mg de tiamina mononitrato,se transfirió cuantitativamente a un matraz aforado de 100 mL, se añadió 70 mL de agua, se agitó hasta completar disolución y se llevó a volumen con el mismo solvente (solución T).
* Estándar de piridoxina clorhidrato: se pesó con exactitud 25,0 mg de piridoxina clohidrato, se transfirió cuantitativamente a un matraz aforado de 100 mL, se añadió 70 mL de agua, se agitó hasta completar...