Tincion de Gram
Páginas: 5 (1185 palabras)
Publicado: 10 de noviembre de 2014
Tinción de Gram
Esta tinción diferencial fué propuesta por el medico danés Christian Gram (1884) (TORTORA et al., 2007) que examinando tejido pulmonar de enfermos fallecidos por neumonía observó que la bacteria Streptococcus pneumoniae, presente en los pulmones, retenía el colorante conocido como marrón Bismark (sustituido posteriormente por el cristal violeta), mientras que el tejidopulmonar no era capaz de retener el colorante.
Es la tinción diferencial más utilizada de forma rutinaria y prácticamente la primera prueba a la que se someten las muestras de cualquier origen antes de su estudio. Proporciona una información esencial, además de sobre la forma, tamaño y agrupación celular, como es el tipo y composición de la pared que presentan las bacterias. La tinción de Gramdivide a las bacterias con pared del Dominio Bacteria en dos grandes grupos: bacterias con pared de tipo gram positiva y bacterias con pared de tipo gram negativa.
Material necesario
Cultivos de bacterias gram positivas: Bacillus cereus y gram negativas: Escherichia coli, frasco lavador, cristalizador, soporte, portaobjetos, asa de siembra, cristal violeta, safranina, lugol y alcohol, aceite deinmersión.
Procedimiento
Poner sobre un portaobjetos una gota de agua y una pequeña alícuota de un cultivo bacteriano con el asa de siembra estéril.
Hacer el frotis, formando una película homogénea sobre el portaobjetos con el asa de siembra. Dejar secar.
Fijar la preparación, pasando a través de la llama del mechero el portaobjetos.
Cubrir con unas gotas de cristal violetadurante 1 minuto.
Lavar el exceso de colorante con agua.
Añadir el mordiente lugol, solución de yodo-ioduro potásico, durante 1 minuto.
Lavar el exceso de mordiente con agua.
Lavar la preparación con alcohol formando un ángulo con la preparación, durante 30 segundos (el tiempo de decoloración es clave para un resultado correcto).
Lavar inmediatamente con abundante agua.
Cubrircon el colorante de contraste, safranina durante 1 minuto.
Lavar el exceso de colorante con agua.
Dejar secar al aire.
Añadir una gota de aceite de inmersión.
Observar con objetivo de inmersión (100 x).
La diferente estructura y organización de la pared celular en estos dos tipos de organismos hace que ambos grupos respondan de manera distinta, así mientras las bacterias grampositivas mantienen y conservan el complejo cristal violeta-iodo, las bacterias gram negativas se decoloran rápidamente con la aplicación del alcohol, admitiendo el colorante de contraste que proporciona un color entre rosa y rojo que contrasta con el intenso color violeta (Figs. 7 y 8).
procedimiento
Gram + Gram -
Observación
Paso 1. Colorante fundamental: cristal violeta durante 1minuto.
Paso 2. Mordiente, solución de yodo y ioduro potásico, 1 minuto.
Paso 3. Decoloración, lavado con etanol, 30 segundos.
Paso 4. Colorante de contraste, safranina 1 minuto.
Las bacterias gram positivas y gran negativas se tiñen de violeta.
Las bacterias gram positivas y gran negativas se tiñen de violeta.
Las bacterias gram positivas mantienen el color violeta, las gramnegativas pierden el colorante.
Las bacterias gram negativas se tiñen de rojo, las gram positivas mantienen su color violeta.
Figura 7. Representación esquemática del procedimiento de la tinción de Gram.
Figura 8 a. Tinción de Gram de Bacillus cereus (bacilos gram positivos). Microscopía de campo claro (100x).
Figura 8 b. Tinción de Gram de Escherichia coli (bacilos Gramnegativos). Microscopía de campo claro (100x).
Se han propuesto diferentes explicaciones para justificar la respuesta de los microorganismos a esta tinción, parece que la diferencia se debe tanto a la estructura física como a la composición de la pared celular, en bacterias Gram positivas la gruesa capa de péptidoglucano con abundantes entrecruzamientos parece contribuir a la retención del...
Esta tinción diferencial fué propuesta por el medico danés Christian Gram (1884) (TORTORA et al., 2007) que examinando tejido pulmonar de enfermos fallecidos por neumonía observó que la bacteria Streptococcus pneumoniae, presente en los pulmones, retenía el colorante conocido como marrón Bismark (sustituido posteriormente por el cristal violeta), mientras que el tejidopulmonar no era capaz de retener el colorante.
Es la tinción diferencial más utilizada de forma rutinaria y prácticamente la primera prueba a la que se someten las muestras de cualquier origen antes de su estudio. Proporciona una información esencial, además de sobre la forma, tamaño y agrupación celular, como es el tipo y composición de la pared que presentan las bacterias. La tinción de Gramdivide a las bacterias con pared del Dominio Bacteria en dos grandes grupos: bacterias con pared de tipo gram positiva y bacterias con pared de tipo gram negativa.
Material necesario
Cultivos de bacterias gram positivas: Bacillus cereus y gram negativas: Escherichia coli, frasco lavador, cristalizador, soporte, portaobjetos, asa de siembra, cristal violeta, safranina, lugol y alcohol, aceite deinmersión.
Procedimiento
Poner sobre un portaobjetos una gota de agua y una pequeña alícuota de un cultivo bacteriano con el asa de siembra estéril.
Hacer el frotis, formando una película homogénea sobre el portaobjetos con el asa de siembra. Dejar secar.
Fijar la preparación, pasando a través de la llama del mechero el portaobjetos.
Cubrir con unas gotas de cristal violetadurante 1 minuto.
Lavar el exceso de colorante con agua.
Añadir el mordiente lugol, solución de yodo-ioduro potásico, durante 1 minuto.
Lavar el exceso de mordiente con agua.
Lavar la preparación con alcohol formando un ángulo con la preparación, durante 30 segundos (el tiempo de decoloración es clave para un resultado correcto).
Lavar inmediatamente con abundante agua.
Cubrircon el colorante de contraste, safranina durante 1 minuto.
Lavar el exceso de colorante con agua.
Dejar secar al aire.
Añadir una gota de aceite de inmersión.
Observar con objetivo de inmersión (100 x).
La diferente estructura y organización de la pared celular en estos dos tipos de organismos hace que ambos grupos respondan de manera distinta, así mientras las bacterias grampositivas mantienen y conservan el complejo cristal violeta-iodo, las bacterias gram negativas se decoloran rápidamente con la aplicación del alcohol, admitiendo el colorante de contraste que proporciona un color entre rosa y rojo que contrasta con el intenso color violeta (Figs. 7 y 8).
procedimiento
Gram + Gram -
Observación
Paso 1. Colorante fundamental: cristal violeta durante 1minuto.
Paso 2. Mordiente, solución de yodo y ioduro potásico, 1 minuto.
Paso 3. Decoloración, lavado con etanol, 30 segundos.
Paso 4. Colorante de contraste, safranina 1 minuto.
Las bacterias gram positivas y gran negativas se tiñen de violeta.
Las bacterias gram positivas y gran negativas se tiñen de violeta.
Las bacterias gram positivas mantienen el color violeta, las gramnegativas pierden el colorante.
Las bacterias gram negativas se tiñen de rojo, las gram positivas mantienen su color violeta.
Figura 7. Representación esquemática del procedimiento de la tinción de Gram.
Figura 8 a. Tinción de Gram de Bacillus cereus (bacilos gram positivos). Microscopía de campo claro (100x).
Figura 8 b. Tinción de Gram de Escherichia coli (bacilos Gramnegativos). Microscopía de campo claro (100x).
Se han propuesto diferentes explicaciones para justificar la respuesta de los microorganismos a esta tinción, parece que la diferencia se debe tanto a la estructura física como a la composición de la pared celular, en bacterias Gram positivas la gruesa capa de péptidoglucano con abundantes entrecruzamientos parece contribuir a la retención del...
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