tecnica PCR

Maria Jose Freire
6to WY
20/08/2014
Laboratorio de PCR
Introducción:
La técnica de amplificación de ADN mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es una técnica que consiste en laamplificación in vitro de un fragmento de ADN específico. Para llevar a cabo el experimento de amplificación es necesario conocer, al menos parcialmente, la secuencia del fragmento a amplificar (ungen, una parte de un gen, una región no codificadora,...). Básicamente, se trata de replicar una y otra vez un mismo fragmento de ADN y, para ello, debemos realizar in vitro lo que hacen las células invivo para replicar su ADN.
Así, se trata de disponer en un tubo de ensayo el ADN de la especie objeto de estudio. Además debemos añadir en dicho tubo un par de oligonucleótidos que actúen comocebadores para la ADN polimerasa. La elección de estos oligonucleótidos (cebadores o primers) es crucial dado que han de delimitar la región a amplificar. En concreto, deben ser complementarios a cada unode los extremos 3´ de la región a amplificar.
La repetición de este ciclo unas 40 veces, por ejemplo, permite obtener, como resultado de un experimento de amplificación, millones de copias delfragmento de interés.
Todo esto, por supuesto, se realiza de forma automatizada. Para ello, los tubos de reacción se introducen en un termociclador que de forma automática realiza los 40 ciclos deamplificación.

Objetivos:
Lograr amplificar una muestra de AND, a partir de una muestra molde
Identificar el organismo
Materiales:
Alambre de bucle
Micropipeta
Cajas Petri con colonias bacterialesTubo de centrifugado
Cronometro
Enzimas digestivas
Solución Buffer
Termociclador
Máquina de centrifugado
Cubeta
PCR master mix
Máquina de PCR
Control positivo de ADN
Agua desionizadaPuntas de pipetas desechables
Hielo
Agua destilada
Máquina de secuenciación de ADN
Tubos de PCR
Columna PCR

Procedimiento:
1. Preparar la muestra
2. Amplificar PCR
3. Purificación de...