Siembra y aislamiento de microorganismos

PROCESOS BIOQUÍMICOS

SIEMBRA Y AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS

OBJETIVO:
Al finalizar la práctica, el alumno debe conocer e identificar el uso de los medios de cultivo por el tipo de muestra o microorganismo
Conocer, describir y aplicar las diferentes técnicas de inoculación de los medios de cultivo
Conocer y emplear la terminología propia del uso de los medios de cultivo

INTRODUCCIÓNSembrar un microorganismo es colocarlo en un ambiente artificial apropiado para que lleve a cabo su metabolismo, su desarrollo y su reproducción. Las técnicas de siembra varían según el estado físico del medio o las necesidades del microorganismo.
Una condición básica de la siembra es que se realice bajo condiciones rigurosas de asepsia, ya que es indispensable evitar el crecimiento de gérmenesdel ambiente en el cultivo. A estos microorganismos se les llama contaminantes.
Si el cultivo tiene un solo tipo de microorganismo se le denomina cultivo puro. Cuando encontramos más de un tipo de microorganismo se llama entonces cultivo mixto.
El proceso mediante el cual se separan los microorganismos se denomina aislamiento y la forma de sembrar puede realizarse de varias formas,dependiendo de la prueba y del medio de cultivo empleado.

MARCO TEÓRICO
MEDIO DE CULTIVO
Medio de cultivo es el material nutritivo en el que se pueden recuperar, multiplicar y aislar los microorganismos, así como efectuar pruebas de susceptibilidad

LA ESCHERICHIA COLI (también conocida por la abreviación de su nombre, E. coli) es quizás el organismo procarionte más estudiado por el ser humano, setrata de una bacteria que se encuentra generalmente en los intestinos animales, y por ende en las aguas negras.

KLEBSELLA PNEUMONIAE es la especie de mayor relevancia clínica dentro del género bacteriano Klebsiella, compuesto por bacterias gramnegativas de la familia Enterobacteriaceae, que desempeñan un importante papel como causa de las enfermedades infecciosas oportunistas. El género fuellamado así en honor a Edwin Klebs, un microbiólogo alemán de finales del siglo XIX.

En la tinción de Gram son negativos (color fucsia); la asimilación y la fermentación de la lactosa se puede observar en el Agar Mac Conkey donde las colonias son de color rosado claro y en el medio Kliger o TSI donde son Ácido/Ácido, es decir fermentador de la lactosa mas produción de gas; y en la fermentaciónacetónica o prueba de Voges Proskauer son positivos. Por último, sus condiciones óptimas de cultivo son en agar nutritivo a 37 °C, ph de 7.0, presión osmótica de 1 atm

NORMA MEXICANA
NMX-AA-42-1987
CALIDAD DEL AGUA DETERMINACION DEL NUMERO MAS PROBABLE (NMP) DE COLIFORMES TOTALES, COLIFORMES FECALES (TERMOTOLERANTES) Y Escherichia coli PRESUNTIVA
Esta Norma Mexicana establece un método para ladetección y enumeración en agua de
organismos coliformes totales, organismos coliformes fecales (termotolerantes) y Escherichia coli presuntiva (E. coli) mediante el cultivo en un medio liquido en tubos
múltiples y él cálculo de sus números más probables (NMP) en la muestra.

MATERIALES
MATERIALES DE LABORATORIO | MEDIOS DE CULTIVO PREPARADOS EN PRÁCTICA NO. 3 |
1 Mechero de Bunsen | |1 Gradilla | Caldo Lactosado |
1frasco estéril1 Pipetas de 10, estéril2 Pipetas de 1ml ,estéril1 Perilla | Agar Eosina azul de metilenoAgar Mac Conkey |
EQUIPO DE LABORATORIO | Agua destilada |
Autoclave | |
Estufa para incubación | |
Refrigerador | |
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| MATERIAL INDIVIDUAL/EQUIPO1 asa bacteriológica |
| Cuaderno de laboratorio |
|Franela (40x40 cm aprox.) |
| Marcador indeleble punta delgada |
| Masking Tape o cinta testigo |
| Algodón o gasas |
| Cubrebocas |
| Guantes de látex estériles |

PROCEDIMIENTO
Las formas de preparación de los medios de cultivo vienen indicadas en cada etiqueta y dependen del fabricante.
Los medios de cultivo que se emplearán en este procedimiento serán los preparados en la...