IFI para Chagas

REACCIÓN DE INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA PARA
TRYPANOSOMA CRUZI



Preparación de improntas
- Portaobjetos con 12 divisiones lavados y desengrasados (detergente no iónico-agua-aguadestilada-alcohol acetona)
- Suspensión de Trypanosoma cruzi: Antígeno procedente del Instituto Nacional de Diagnóstico e Investigación de la Enfermedad de Chagas “Dr. Mario Fatala Chaben”. Resuspender envortex hasta homogeinización total
- Preparar una suspensión diluyendo el antígeno con agua destilada estéril según indicación del rótulo (Título de la suspensión)
- Resuspender en vortex hastahomogeinización total
- Prueba control: Tomar 10 μl de la suspensión antigénica, depositar en una división del portaobjeto, dejar reposar unos minutos. Observar microscópicamente a 400x aumentos con luzdirecta. Controlar la concentración de epimastigotes: no se deben observar grumos y tener un buen número de parásitos por campo microscópico
- Agitar periódicamente en vortex mientras se realizan lasimprontas
- Preparación: Colocar 10 μl de suspensión en cada división del retículo
- Secar al aire caliente
-Fijar flameando suavemente a la llama
- Lavar por inmersión con agua destilada estéril- Envolver con papel absorbente y papel de aluminio.
- Guardar en freezer a –20ºC...............................................................................................................................................................









TÉCNICA DE INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA

Efectuar una dilución 1/30de los sueros control (negativo) y desconocidos en el bufferEfectuar diluciones 1/30, 1/60, 1/120 y 1/240 del suero control positivo
Homogeneizar las diluciones en vortex
Cubrir cada división del retículo con los sueros controles y desconocidos de la siguientemanera

Inmunofluorescencia para Chagas
Testigo (+) 1/30
Testigo (+) 1/60
Testigo (+) 1/120
Testigo (+) 1/240
?
?
?
Buffer
?
?
?
Testigo negativo

Incubar 30 minutos a 37ºC en...