Hongos

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE GUERRERO

UNIDAD ACADÉMICA DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS

Practica no. 1
AISLAMIENTO DEL DNA.

MATERIA
BIOQUÍMICA

PROFESOR
LADISLAO REYES TABOADA

ALUMNAS:

* ANA KAREN SOLÍS BARRIGA
* YURIDIA GÓMEZ ABARCA
* MA. DEL CARMEN SOLÍS G.
* RAQUEL L. OCAMPO SARABIA
* SAMANTHA C. PINEDA GALEANA

GRUPO: 204 TURNO: VESPERTINOCHILPANCINGO, GRO. A 25 DE MARZO DEL 2009.

OBJETIVO
* Aislar el ADN cromosómico.

INTRODUCCIÓN
El estudio de los genes mediante diversas técnicas, que de carácter universal se llama “de biología molecular”, permite diagnosticar con rapidez y precisión enfermedades hereditarias, infecciosas y neoplasias. Estas técnicas se están incorporando de forma progresiva a los laboratoriosclínicos, donde pasaran a ocupar un puesto importante.
Todos los estudios moleculares, requieren aislar el acido nucleico. Una vez hecho esto, a menudo es necesario saber la cantidad de acido nucleico.
El acido nucleico puede obtenerse a partir de homogeneizados de tejidos o partir de células sanguíneas. Los especimenes de tejidos sólidos deben romperse antes de comenzar cualquier procedimiento deaislamiento de ADN.
Normalmente, esto se realiza sometiendo al espécimen a fuerzas mecánicas que proporcionen células individuales disociadas con un mínimo de lisis. La rotura mecánica se consigue, generalmente, con un homogenizador. Sin embargo cuando se desea ADN de gran peso molecular, deben inhibirse las nucleasas, manteniendo los especímenes de tejidos a temperaturas muy bajas. Para ello justodespués de la escisión, se congela el espécimen en nitrógeno líquido y a continuación se realiza la rotura, pulverizando el tejido en presencia de hielo seco con un mezclador eléctrico o un mortero y un pistón. Tras sublimar el hielo seco de la mezcla de polvo resultante, pueden resuspender las células para iniciar el procedimiento de aislamiento de ADN.
Para los especímenes de sangre, se recogesangre con acido etilendiaminotetraacetico (EDTA) como anticoagulante. Aunque los leucocitos nucleados son solo una pequeña minoría del total de las células sanguíneas, pueden separarse fácilmente del plasma y de los glóbulos rojos mediante centrifugación. La capa resultante de de glóbulos blancos se separa y se resuspende en un tampón adecuado para aislar el ADN. El contenido de este acido delas células humanas es de unos 5 pg, y a partir de 20 mL de sangre anti coagulada con EDTA pueden obtenerse entre 250 y 500 μg.
Existen muchas variaciones en los detalles de los protocolos de aislamiento del ADN, pero todos requieren, como primer paso, la lisis de las células y los núcleos. Con este fin, se incuba la suspensión celular con detergentes y/o enzimas líticas.
El paso siguiente esdisociar el ADN de las proteínas que lleva unidas. La mayoría de los protocolos utilizan una enzima proteolítica fuerte como la proteinasa K.
Este paso también inactiva las nucleasas celulares que degradan el ADN. Las proteínas parcialmente degradadas se eliminan de la disolución mediante la extracción con fenol/cloroformo, una precipitación salina o el paso de la disolución por una columna queretenga el ADN. Este se precipita de la solución por medio de etanol.
El ADN en forma de grumo, puede recogerse con una varilla de vidrio. Se seca y se redisuelve en un tampón de acuoso adecuado y, de esta forma, es estable durante varios años.
Actualmente hay extractores automáticos de ADN, capaces de preparar varios especímenes en unas pocas horas y que hacen mínima la intervención de losoperadores.

MATERIAL:
* Gradilla con dos tubos de ensayo
* Pipetas de 1 y 5 ml
* NaOH 0.2 N-SDS (lauril sulfato de sodio) a 1%
* Etanol absoluto frio
* Tritón X-100 a 1%
* NaCl 0.1 mol/L
* Bacterias en cultivo (E.coli)
* Gotero con EDTA como anticoagulante
* Sangre humana

MÉTODO I

1. Tomar 5 ml de un cultivo de bacterias y centrifugar durante 5 min...