GUIA TECNICA DE TRAZABILIDAD DE INCERTIDUMBRE EN HUMEDAD

UNIVERSIDAD CENTRAL DE VENEZUELA
ESCUELA DE QUIMICA
FACULTAD DE CIENCIAS
INSTRUMENTAL ANALITICO














GUIA DE METODOS DE ANALISIS POR CROMATOGRAFIA LIQUIDA DE ALTA EFICIENCIA















Caracas 2008
Profa. Rosa Amaro
Prof. Luis Gómez
Prfa. Yosmery Vita


TABLA DE CONTENIDO

Contenido
Determinación de ácido ascórbico en una pastilla devitamina C. 3
Justificación 3
Objetivos. 3
Parte Experimentales 3
Referencia 5
Determinación de cafeína en refresco (PEPSI) 6
Justificación 6
Objetivos 6
Parte Experimentales 7
Determinación cualitativa y cuantitativa de HAP en particulado atmosférico 9
Justificación 9
Objetivos 9
Parte Experimental 10
Determinación del ácido hipúrico, y los isómeros orto, meta y para del ácido metilhipúrico en muestra biológica 13
Justificación 13
Objetivos 14
Parte Experimental 14
Referencias 16
Bibliografía 17






Determinación de ácido ascórbico en una pastilla de vitamina C.
Justificación
Objetivos.

General:

 Determinar el contenido de ácido ascórbico en una pastilla de vitamina C usando la técnica de cromatografía de líquidos de alta eficiencia (HPLC), a fin defamiliarizar al alumno en el uso de dicha técnica.

Específicos:

 Adiestrar al alumno de forma general en el manejo de equipos de cromatografía líquida de alta eficiencia.
 Aprender el tratamiento adecuado de los solventes y muestra: filtración y desgasificación de los mismos.
 Ajustar los parámetros instrumentales, que permitan obtener una buena separación de los picos en la muestra de vitaminaC.
 Preparar patrones de ácido ascórbico.
 Analizar cuantitativamente la pastilla de vitamina mediante el uso de una curva de calibración.

Parte Experimentales

Instrumentación

Cromatógrafo de líquidos de alta eficiencia: Jasco L6-2080-02 Terniary gradient, Jasco PU-2080 plus HPLC pump, Desgasys Populaire.
Detector: UV/Vis – 2075 plus ( Fotomultiplicador)
Jeringa: Tipo Hamilton,apreciación: 2 μL
Columna de acero Inoxidable (C18) Longitud: 250 mm Diámetro interno: 4.6 mm y Tamaño de partícula: 5 (μm)

Preparación del Sistema HPLC

1. Emplear eluentes grado HPLC.
2. Filtrar los eluentes a utilizar en la práctica.
3. Desgasificar los eluentes por un tiempo aproximado de 10 min con ultrasonido o 3 min con burbujeo de gas He..
4. Escoger el eluente y/o los eluentes autilizar en la separación cromatográfica para poder realizar la purga con estos.
5. Realizar la purga del equipo mediante la apertura de la válvula de la bomba (solo dar dos vueltas), y colocar el flujo en el botón designado como 2/flow en un valor de 5 mL/min. presionar enter para dejar este valor como preestablecido luego de esto presionar el botón “pump” para encender la bomba y dejar la purgapor 5 min. aproximadamente.
6. Si es un solo eluente colocar la salida de estos de forma manual de lo contrario si se va emplear mezcla de eluente colocar programación de los mismos.
7. Colocar el flujo en 0,2 mL/min. y luego cerrar la válvula y de esta manera se hace pasar el eluente(s) por la columna y las demás conexiones contiguas a la bomba. Al estabilizarse la presión se puede iraumentando el flujo de 0,1 en 0,1 mL/min hasta llegar a 1 mL/min.
8. Una vez realizados los pasos anteriores puede procederse a inyectar la muestra a analizar y los patrones para la cuantificación.

Condiciones Experimentales

 Volumen de inyección 10μL
 Detección a 254 nm
 Flujo: 1mL/min
 Fase móvil: 50 mM de KH2PO4

Preparación de la curva de calibración.



Preparación de la muestraSe pesa la pastilla inicialmente (Dato que debe ser colocado en el informe)

Se pulveriza la pastilla:

se pesan tres muestras de 0.30000 g

Se disuelven en agua y se enrazan en 100mL.

Se realiza una dilución de 0.40mL en 25 mL de cada una después
de filtrar la muestra en un filtro de celulosa


Se inyectan al cromatografo


Referencia

 Cavazos R, N. A.; Rivera Z,...