Factores que afectan la actividad enzimatica

FUNDAMENTO TEORICO

FACTORES QUE AFECTAN A LA ACTIVIDAD ENZIMATICA
Debido a la naturaleza proteica, las enzimas se ven afectadas en su actividad y estructura por los mismos factores que afectan a las demás proteínas, entre los que cabe destacar:
A) INGLUENCIA DEL PH
El pH del medio es el responsable de que los grupos funcionales de las enzimas (-COOH, -NH2, -OH, -SH) pueden estarcargados positiva, y negativamente, o posean carga neutra. Recordar que las variaciones del ph pueden ocasionar un cambio en la estructura tridimensional de las enzimas, que pueden afectar en su actividad.
Existe un pH óptimo en que la concentración de H+ es la idónea para que se produzca la actividad catalítica. También existe una banda, que oscila entre un valor del pH mínimo y otro máximo, donde laenzima puede actuar. Para valores situados fuera de esta zona no existe actividad enzimática, dado que las cadenas polipeptídicas se pueden desnaturalizar. La mayor parte de las enzimas poseen un pH próximo al del estado neutro.

B) INFLUENCIA DE LA TEMPERATURA
Las reacciones catalizadas por enzimas siguen, por regla general, la ley de Van t’Hoff que establece que cada diez grados de aumentode la temperatura se produce un aumento de velocidad de la reacción de dos a cuatro veces. Esta regla se cumple dentro de unos limites, ya que las enzimas, debido a su naturaleza proteica, son termolábiles, siendo afectadas por las variaciones de la temperatura e inactivándose al desnaturalizarse.
Cada enzima posee una temperatura óptima de funcionamiento, que en las enzimas humanas suele estaralrededor de 37ºC.

MATERIALES Y REACTIVOS

* Vaso precipitado
* Gradilla
* Pipeta
* Tubos de ensayo
* Maquina de baño maría
* Solución de almidón 1%

* Enjuague bucal (amilasa)
* Agua destilada
* Reactivo lugol
* Buffer pH 5
* Buffer pH 6.8
* Buffer pH 8

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
1.- VELOCIDAD DE REACCIÓN VS CONCENTRACIÓN ENZIMÁTICA:
*Realizar un enjuague bucal con 20 ml de agua destilada por 2 minutos, este servirá como muestra para los posteriores experimentos.

20 ml



1/10
1/160
1/80
1/40
1/20


1 ml de 1/20 +
9 ml de agua dest.
1 ml de 1/80 +
9 ml de agua dest.
1 ml de 1/40 +
9 ml de agua dest.
1 ml de 1/10 +
9 ml deagua dest.
1 ml de amilasa +
9 ml de agua dest.





1/160

1/80
1/40
1/20
1/10

2 ml de 1/10 +
8 ml de almidón
2 ml de 1/10 +
8 ml de almidón
2 ml de 1/10 +
8 ml de almidón
2 ml de 1/10 +
8 ml de almidón
2 ml de 1/10 +
8 ml de almidón

B.M 38C. Tomar alícuota cada 5 minutos para comprobar hidrólisis con reactivo de lugol.

2.- VELOCIDAD DE REACCIÓN VSTEMPERATURA:

1
3
2

0.5 ml de amilasa + Baño de hielo x 5 min + 1 ml de almidón + Baño de hielo x 15 min.
0.5 ml de amilasa + 1 ml de almidón + B.M 38 c x 15 min.
0.5 ml de amilasa + B.M Hirv. x 5 min + 1 ml de almidón + B.M 38 c x 15 min.

*Comprobar hidrólisis con Reactivo de lugol ( 1 gota aprox.)

3.- VELOCIDAD DE REACCIÓN VS pH:

3
2
1

2 ml de buffer pH 6.8 + 2 ml deamilasa + 4 ml de almidón + B.M 38 C x 15 min
2 ml de buffer pH 8 + 2 ml de amilasa + 4 ml de almidón + B.M 38 C x 15 min
2 ml de buffer pH 5 + 2 ml de amilasa + 4 ml de almidón + B.M 38 C x 15 min

*Comprobar hidrólisis con Reactivo de lugol (3 gotas aprox.)

CÁLCULOS Y RESULTADOS
VELOCIDAD DE REACCIÓN VS TEMPERATURA
Tubo 1: Se aprecia unacoloración azul intenso, después de agregarle el lugol, lo que nos evidencia una hidrólisis negativa. Se produce una desnaturalización de la enzima evitando que actúe, ya que la enzima fue sometida a elevadas temperaturas.
Tubo 2: Se observa una coloración parduzca amarillenta translúcido. Esto se debe a que se produjo una hidrólisis total ya que la enzima estaba en su temperatura óptima de 38 C y...