ELISA

CERON CORTES ZYANYA JASHER

E.L.I.S.A
Enzyme Linked
ImmunoSorbent Assay

Antecedentes
 El

nombre enzyme-liked immunosorbent
assay, luego abreviado como ELISA, fue
acuñado por los investigadores suecos
Eva Engvall y Peter Perimann, los cuales
describieron el procedimiento, publicado
en 1971.
 Las aplicaciones mas interesantes se
iniciaron en el campo de la microbiología
y parasitología.ELISA
Ensayo de InmunoAbsorción Ligado a
Enzimas.
 Se

considera ligado a enzima porque una enzima
se une químicamente a un anticuerpo en las dos
versiones de la prueba (indirecta y directa)
 El inmunoabsorvente, se refiere al hecho de que
los antígenos o anticuerpos son adsorvidos a un
plástico.
ELISA puede investigar la presencia de un
antígeno o de un anticuerpo.

DEFINICIÓN

ELISA

• El ELISAse basa e el uso de antígenos o
anticuerpos marcados con una enzima, de forma
que los conjugados resultantes tengan actividad
tanto inmunológica como enzimática.
•

Al estar uno de los componentes (antígeno o
anticuerpo) marcado con una enzima e
insolubilizado sobre un soporte
(inmunoadsorbente) la reacción antígenoanticuerpo quedará inmovilizada y, por tanto, será
fácilmente revelada mediantela adición de un
substrato especifico
• El cual al actuar la enzima, producirá un color
observable a simple vista o cuantificable mediante

Antígenos







Los antígenos son, por definición, generadores
de anticuerpos.
Incluyen proteínas, polisacáridos y varias
moléculas
pequeñas,
que
estimulan
la
producción de anticuerpos.
Los antígenos son, a menudo, moléculas que se
definen como o extrañas, para el
organismo.
Hay que actúan como
etiquetas de identificación

Anticuerpo







Son la respuesta del organismo ante la presencia de
un agente infeccioso.
Los anticuerpos son moléculas proteicas secretadas
por los plasmocitos, y tienen una altísima afinidad por
sus antígenos correspondientes.
Anticuerpos se caracterizan por:
– Ser Defensa natural
–Tener Utilidad terapéutica
– Tener Utilidad Diagnóstica
Marcador de Infección o exposición.
Detección de antígenos
Los anticuerpos utilizados en el método ELISA son de
origen monoclonal o policlonal.

Anticuerpo
Policlonales

 Anticuerpos

Heterogéneos
Reconocen epítopes diferentes del Ag
Producidos por numerosos clones de
Linfocitos B
 Anticuerpos Monoclonales
Homogéneos
Especificidad únicaProducidos por un único clon de
Linfocitos B

Controles
Se utilizan para asegurar que la prueba
esta funcionando correctamente
 Control

POSITIVO
Incluyen una sustancia que se sabe que
reaccionara positivamente,
proporcionando así, un patrón sobre el
cual basar los resultados.
 Control

NEGATIVO
Incluyen sustancias que no deben
reaccionar .

Fundamento del
ELISA
Ag o Ac
fijado a
una fase
SólidaAg o Ac
en la
Muestra

Conjugado:
Ac unido a
ENZIMA

SUSTRATO

CAMBIO
DE
COLOR

Elementos del
ELISA
FASE

SÓLIDA
Antígeno o
Anticuerpo
Conjugado: ENZIMA
SUBSTRATO

Fase Sólida
SE PUEDEN UTILIZAR DOS TIPOS DE SUSTANCIAS
 Las que favorecen la adsorción física (por fuerzas
electroestáticas) de las moléculas de Ags o Acs:
poliestireno, cloruro de polivinilo, polipropileno,
nylon y silicona.
Las que permiten la fijación covalente de esos
reactivos: acrilamida, celulosa y isoticianato
 Los
mejores resultados se obtienen con el
peliestireno
y el polvinilo, por su rigidez,
transparencia y propiedades adsortivas.

Conjugado: Enzima
La enzima escogida como marcador debe:
Unirse fácilmente a antígenos y anticuerpos,
Encontrarse en estado puro a un precio razonable y
 Tener un substratocromogénico o fluorogénico
conveniente y de fácil preparación.




Las enzimas más utilizadas
son fosfatas alcalina,
peroxidasa de rábano y ßgalactosidas

Substrato
La elección del substrato es de gran
importancia para la estandarización del
método ELISA y hay que tener varios
factores en cuenta, como son
sensibilidad, especificidad, facilidad de
lectura, así como estabilidad después de la...

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