Biologia

Medición de las actividades de papel de filtro de celulasa con el ensayo basado en una microplaca
Xiaoxiao Yub, 1,
• Yan liua, 1,
• Yuxiao Cuia,
• Qiyue Chenga,
• Zaixiao Zhanga,
• Jia Hui Lua,
• Qingfan Menga,
• Lirong Tenga,
• Xiaodong Rena,,

1. Introducción
Lignocelulosas son los más abundantes Bioresource renovables en el mundo. La celulasa, que ha sido ampliamente utilizado en elprocesamiento de alimentos, es la enzima crítica que podría catalizar la celulosa a oligosacáridos y glucosa (Patindol et al., 2007, Kapasakalidis et al., 2009, Renouard et al., 2010 y Abbès et al ., 2011). De hecho, la celulasa es un sistema que consiste en endoglucanasas, exoglucanasas, y β-D-glucosidasas, todos los cuales hidrolizan sinérgica celulosa cristalina. Las actividades celulasa siempre semiden utilizando celulosa insoluble. La heterogeneidad de celulosa insoluble y la complejidad del sistema de celulasa causan problemas formidables en la medición de la actividad total de celulasa (Mullings, 1985, Criquet, 2002, Helbert et al., 2003, Eveleigh et al., 2009, Farnet et al., 2010 y Dashtban et al., 2010). El total de ensayo más común la actividad celulasa es el ensayo de papel de filtro(FPA) utilizando papel de filtro Whatman No. 1. como sustrato, que fue establecido y publicado por la Unión Internacional de Química Pura y Aplicada (IUPAC) (Zhang et al., 2006 y Batool et al., 2015). La idea principal del método IUPAC es que celulasa debe ser diluido hasta que la cantidad de producto representó frente a la concentración de celulasa es razonablemente lineal. El ensayo requiere unacantidad fija (2 mg) de glucosa liberada a partir de un papel de filtro de 50 mg (1 × 6 cm). Se requiere una serie de soluciones de dilución de celulasa para lograr un grado fijo de hidrólisis (Ghose, 1987 y Butt et al., 2015).
Aunque el método IUPAC es aceptado en todo el mundo, todavía hay algunas deficiencias para los ensayos de FPA, tales como intensidad de mano de obra, bajo rendimiento, y querequieren una gran cantidad de sustrato, celulasa y productos químicos. Varios métodos han sido desarrollados para el propósito de la actividad de la celulasa de alto rendimiento de cribado estos años (Boyer et al., 2002, Goddard y Reymond, 2004, Xiao et al., 2005, Kasana et al., 2008, King et al., 2008 y Peralta et al., 2008). Decker encontró que la sustitución del papel de filtro conSolka-floc, Sigmacell-20, Avicel y borra de algodón, el ensayo para un sustrato en lugar similar en propiedades hidrolíticas al papel de filtro podría ser automatizado en un robótica cubierta Cyberlabs C400 (Ashraf et al., 2013 y Decker et al., 2003). Berlin utiliza el disco hecha de álamo amarillo para estimar la hidrólisis de la celulosa en glucosa en una microplaca de 96 pocillos. El ensayo muestra unaconsiderable tiempo y beneficios de costo más el ensayo estándar (Berlin et al., 2005). Chundawat desarrolló un procedimiento con el 96 pocillos método de microplacas Biomasa Conversión Laboratorio de Investigación para el ensayo de alto rendimiento de celulasa. El procedimiento completo se automatizó usando una estación de trabajo de pipeteo robótico (Chundawat et al., 2008). Los trabajosanteriores están desarrollados para cribado de alto rendimiento, por lo que la precisión del método no se dio cuenta antes (Kiyani et al., 2014 y Khaskheli et al., 2015).
Xiao et al. (Xiao et al., 2004) desarrolló un ensayo de alto rendimiento para determinar la actividad celulasa llama el ensayo de papel de filtro basado en una microplaca (MFPA). En el MFPA, se añadió celulasa (20 l) para microplaca depocillos que contienen trozos de papel de filtro con un diámetro de 7 mm y tampón de citrato de sodio. Después de la incubación durante 60 min a 50 ° C, la reacción DNS se utiliza para medir la cantidad de glucosa liberada. El MFPA se puede utilizar para ensayar rápidamente un gran número de muestras. A pesar de las reacciones se realizan en diferentes recipientes, partes de los procedimientos de...