Western Blot
Páginas: 8 (1981 palabras)
Publicado: 14 de septiembre de 2011
TÉCNICA WESTERN BLOT
INTRODUCCIÓN
Una parte importante en la investigación es la purificación e identificación de diferentes moléculas biológicas, cómo las proteínas. Las cuales deben de encontrarse libres de contaminantes si se han de caracterizar adecuadamente. La primera etapa es el aislamiento de las proteínas, habitualmente las proteínas son liberadas de las células. Elmétodo de elección depende del tejido de procedencia, así como la localización de las proteínas en la célula. Si la proteína se localiza en el citosol, su liberación sólo requiere la apertura de la célula por ruptura (lisis), es el método más sencillo y suave de efectuar. Ya separada la proteína de su entorno natural, debe de controlarse todas las fases del proceso de purificación. Existendiferentes métodos de purificación como por ejemplo la cromatografía de intercambio iónico, la cromatografía sobre papel, la cromatografía de afinidad, la cromatografía de resolución elevada (HPLC), la electroforesis, etc.
El Western Blot es un método para identificar proteínas en una mezcla compleja de proteínas, transfiriendo las proteínas separadas mediante el peso molecular, de unmedio gelificado a una membrana de nitrocelulosa de unión de las proteínas para su análisis.
MATERIAL Y MÉTODOS.
|Extracción de proteína |Para realizar electroforesis |
|Tubos ependorf de 2 ml y 600 μl |1 Cámara de electroforesis:|
|Centrífuga a 13000 rpm durante 10 min a 4ºC |1 Fuente de poder |
|1 Juego de micropipetas con puntas |1 Baño María 95 oC. |
|Hielo |1 Jeringa Hamilton de 50 μl|
|Cámara multipozos o gradilla para ependorff |Tubos eppendorf de 1000, 600, 200 μl. |
|Determinación de proteínas |Para realizar el Western Blot |
| |1Cámara de transferencia: 2 placas de plástico. |
| |2 Cajas de plástico para contener la membrana de transferencia 8.5 X 5.5. cm |
| |4-5 Cajas de plástico para contener los geles, lavar membrana, contener agua y |
||soluciones. |
|Para realizar 2 geles: |1 Fuente de poder |
| |1 Agitador de placas.|
|2 Viales con agitador magnético. |Regla y lápiz |
|1 Parrilla con agitación. |Hielo |
|Guantes |Papel filtro Watman no. 3|
|2 juegos de vidrios limpios. 2 peines |Membrana de Nitrocelulosa |
|1 Juego de micropipetas con puntas |Tubos para centrífuga de 50 y 10 ml, Costar |
SOLUCIONES
|Extracción de Proteínas...
INTRODUCCIÓN
Una parte importante en la investigación es la purificación e identificación de diferentes moléculas biológicas, cómo las proteínas. Las cuales deben de encontrarse libres de contaminantes si se han de caracterizar adecuadamente. La primera etapa es el aislamiento de las proteínas, habitualmente las proteínas son liberadas de las células. Elmétodo de elección depende del tejido de procedencia, así como la localización de las proteínas en la célula. Si la proteína se localiza en el citosol, su liberación sólo requiere la apertura de la célula por ruptura (lisis), es el método más sencillo y suave de efectuar. Ya separada la proteína de su entorno natural, debe de controlarse todas las fases del proceso de purificación. Existendiferentes métodos de purificación como por ejemplo la cromatografía de intercambio iónico, la cromatografía sobre papel, la cromatografía de afinidad, la cromatografía de resolución elevada (HPLC), la electroforesis, etc.
El Western Blot es un método para identificar proteínas en una mezcla compleja de proteínas, transfiriendo las proteínas separadas mediante el peso molecular, de unmedio gelificado a una membrana de nitrocelulosa de unión de las proteínas para su análisis.
MATERIAL Y MÉTODOS.
|Extracción de proteína |Para realizar electroforesis |
|Tubos ependorf de 2 ml y 600 μl |1 Cámara de electroforesis:|
|Centrífuga a 13000 rpm durante 10 min a 4ºC |1 Fuente de poder |
|1 Juego de micropipetas con puntas |1 Baño María 95 oC. |
|Hielo |1 Jeringa Hamilton de 50 μl|
|Cámara multipozos o gradilla para ependorff |Tubos eppendorf de 1000, 600, 200 μl. |
|Determinación de proteínas |Para realizar el Western Blot |
| |1Cámara de transferencia: 2 placas de plástico. |
| |2 Cajas de plástico para contener la membrana de transferencia 8.5 X 5.5. cm |
| |4-5 Cajas de plástico para contener los geles, lavar membrana, contener agua y |
||soluciones. |
|Para realizar 2 geles: |1 Fuente de poder |
| |1 Agitador de placas.|
|2 Viales con agitador magnético. |Regla y lápiz |
|1 Parrilla con agitación. |Hielo |
|Guantes |Papel filtro Watman no. 3|
|2 juegos de vidrios limpios. 2 peines |Membrana de Nitrocelulosa |
|1 Juego de micropipetas con puntas |Tubos para centrífuga de 50 y 10 ml, Costar |
SOLUCIONES
|Extracción de Proteínas...
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