inmunohistoquimica

Técnicas por inmunohistología indirecta
Normalización de las pruebas de inmunofluorescencia ha sido difícil de lograr. Como resultado, uno de vez en cuando encontramos grandes diferencias de litros entre los laboratorios que realizan los mismos ensayos de inmunofluorescencia indirecta, como la ANA. Ha habido algunos intentos de mejorar la normalización. Uno de ellos es el conjunto de normas deANA que se pueden obtener a partir de los Centros de Control de Enfermedades (CDC) de Atlanta o el azulejo de la Arthritis Foundation. Ellos proporcionan la especificidad de la reacción (por ejemplo, SSA / Ro) de un suero y la gama habitual de título (por ejemplo, 160 a 1.280) que se espera para esa muestra. Dado que estos reactivos son preciosos, hay que compararlos con las muestras observadasen el propio laboratorio. Muestras que reaccionan similares desde el laboratorio de uno se debe elegir como los estándares. Las alícuotas de estas muestras deben ser congeladas y se ensayaron como desconocidos por los técnicos para ayudar a garantizar la coherencia en la interpretación. Una o dos veces al año, ellos deben ser comparados con los estándares de los CDC.
Los títulos varían con laóptica del alcance de micro utilizado (lente, condensador, fuente de luz, la edad de la bombilla, la orientación del filamento en el bulbo), tipo de fluorocromo utilizado, la concentración del fluorocromo, la afinidad del anticuerpo utilizado, y la experiencia del observador. Mediante el uso de preparaciones estándar, tales como los de la CDC, un laboratorio puede ver dónde encajan con otroslaboratorios. La participación en las encuestas nacionales, tales como los ofrecidos por el Colegio Americano de Patólogos, es otra técnica útil para comparar la reactividad de un laboratorio a otro. La interpretación de intensidad de fluorescencia se puede estandarizar un poco con el uso de una diapositiva estándar óptica, que contiene perlas de látex que presentan fluorescencia con distintos grados deintensidad. Esto permite que el observador tenga una imagen real de la fluorescencia asociada con diluciones en serie de reactivos.
Pruebas indirectas inmunohistología todos requieren un sustrato apropiado. El sustrato puede ser un microorganismo, una línea de células de cultivo de tejido, una línea celular de cultivo de tejidos infectados con un tipo particular de virus, secciones congeladas deórganos específicos. O incluso fijado con formalina, tejidos embebidos en parafina. La clave es que el sustrato sea consistente de un lote a otro y de un laboratorio a otro. Originalmente, los laboratorios preparan sus propios sustratos para serología. Esto condujo a grandes dificultades en la reproducibilidad porque cada laboratorio tenía su propio método. Incluso cuando los métodos de preparacióndel sustrato se estandarizaron en la literatura, que era difícil obtener datos reproducibles de diferentes laboratorios. Como kits comerciales para la serología y pruebas de autoanticuerpos se han estandarizado, que ha resultado en una mayor uniformidad de las pruebas entre los laboratorios y, por lo tanto, la mejora de la fiabilidad de los métodos para el diagnóstico clínico. Tenga cuidado, sinembargo. El hecho de que un fabricante comercial muy conocido es la producción del producto, no se puede asegurar que cada lote se ha realizado correctamente. Por lo tanto, a pesar de que la mayoría de los laboratorios clínicos no preparan sus propios sustratos, deben establecer sus propios programas de garantía de calidad y control de calidad para asegurar las pruebas adecuadas.
La dilución desuero del paciente para aplicar al sustrato es única para cada ensayo (fig. 20.1). Típicamente, una dilución de cribado se utiliza primero y, si es positivo, diluciones en serie (generalmente doble) se utilizan para establecer el título de anticuerpo específico presente. Después se diluye la muestra, se aplica al sustrato durante 20-30 minutos en una cámara de humedad. Es de vital importancia que...