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PRÁCTICA 1

SEPARACIÓN DE AMINOÁCIDOS POR CROMATOGRAFIA EN PAPEL

INTRODUCCIÓN
La cromatografía es una técnica que se utiliza ordinariamente para separar una serie de solutos disueltos en un disolvente común, utilizando uno o más de los siguientes fenómenos: adsorción diferencial, partición líquido-líquido o intercambio iónico. Las variantes más comunes empleadas para este fin, son lacromatografía en columna, cromatografía en papel y cromatografía por intercambio iónico.

La cromatografía en papel es una técnica muy sencilla basada en la adsorción diferencial y la partición líquido-líquido, este último fenómeno se refiere al hecho que una sustancia (soluto) puede exhibir diferentes grados de solubilidad en 2 o más disolvente. Usualmente, en una pieza de papel filtro seaplican puntos (gotas) de una solución acuosa con la mezcla de compuestos, cerca del borde de uno de los dos márgenes libres; se engrapan los bordes libres para formar un cilindro y se coloca en una cámara saturada con el vapor de un segundo disolvente (orgánico). El fondo de la cámara contiene una cantidad de disolvente el cual migra a través del papel por capilaridad, se cierra la cámara y se dejaque la cromatografía proceda hasta que el disolvente alcanza el tope del papel. Si las muestras no son coloreadas, después de la cromatografía se revelan haciéndolas reaccionar con un reactivo específico.

Las moléculas pueden caracterizarse midiendo la distancia de migración del disolvente y la distancia de migración de una fracción determinada, si la relación de tales distancias se procesacomo distancia del soluto/distancia del disolvente, se conoce el valor de Rf para esa sustancia; si las condiciones se mantienen constantes, este valor es reproducible y puede utilizarse para caracterizar una molécula. El valor de Rf variará de acuerdo al disolvente o mezcla de disolventes, la temperatura y la naturaleza del papel que sean utilizados. Esta técnica puede practicarse haciendo que eldisolvente ascienda o descienda a través del papel denominándose respectivamente, cromatografía ascendente o descendente.

OBJETIVOS

- Comparar las propiedades de solubilidad de los diferentes aminoácidos mediante su separación por cromatografía en papel.
- Separar e identificar los aminoácidos presentes en un extracto hidrolizado de células vegetales, por medio de la cromatografía enpapel.

|Material | |Reactivos |
|1 mortero con pistilo. | |Mezcla de Butanol-Ac.acético-agua 4:1:1 v/v. |
|1 balanza semianalítica. | |Soluciones al 0.1% de cada uno delos 20 aminoácidos. |
|1 centrífuga clínica. | |Solución de ninhidrina 0.1 % en etanol- piridina-acetona (7:2:1) v/v. |
|5 tubos de vidrio de 15 x 100 mm. | |Mezcla de metanol-cloroformo-agua (12:5:3) v/v. |
|2 tubos para centrífuga. ||Cloroformo (presentación comercial). |
|1 piseta con agua destilada. | | |
|1 gradilla. | |Material que debe traer el alumno. |
|1 cámara cromatográfica.| |Muestra para extracción de aminoácidos, se sugiere hojas de perejil |
|1 atomizador. | |(Petroselinum sativum). |
|1 horno o parrilla eléctrica. | |1 carrete de hilo blanco. |
|1...