Espectro

Revista Cubana de Farmacia
versión impresa ISSN 0034-7515
Rev Cubana Farm v.30 n.1 Ciudad de la Habana ene.-abr. 1996
 
Empresa de Productos Biológicos "Carlos J. Finlay"
Purificación de antígeno de Candida albicans para pruebas cutáneas: estudio preliminar
Miriam Díaz, Isis García,1 Isabel Giraldino,2 Zuleyka López,3 y Miriam García,2
1 Licenciada en Farmacia. Investigadora Agregada. 2 Licenciada en Microbiología. 
3 Licenciada en Bioquímica. Investigadora Agregada. 
4 Licenciada en Bioquímica.
RESUMEN
La evaluación de la inmunidad celular mediante la respuesta producida por los linfocitos T, que son estimulados por la presencia de un antígeno determinado, es de sumo interés para el tratamiento de diversas enfermedades infecciosas que se producen durante el transcurso dequemaduras, lesiones, traumatismos, etcétera, por lo que la obtención de antígenos purificados para su uso en pruebas cutáneas que se emplean para dicha evaluación es de gran importancia. En nuestro trabajo nos dimos a la tarea de desarrollar un método de purificación para la obtención de uno de estos antígenos, a partir de la Candida albicans. El método utilizado fue el descrito por Buckley et al.,al cual se le realizaron modificaciones. Se encontró que la metodología era adecuada y reproducible, pues el antígeno obtenido tenía características similares al antígeno de referencia.
Palabras clave: ANTIGENOS/aislamiento y purificación; CANDIDA ALBICANS/aislamiento y purificación. INMUNIDAD CELULAR; LINFOCITOS T; TEST CUTANEOS.
INTRODUCCION
En las últimas décadas el desarrollo de lainmunología ha permitido determinar las alteraciones en la respuesta inmune mediada por células ante agresiones, como: traumas, desnutrición, sepsis, entre otras, por lo que es de gran interés para la clínica el diagnóstico rápido y confiable de estas alteraciones para aplicar la terapia adecuada en dependencia de la afección específica.
Numerosas técnicas han sido utilizadas para el estudio de lainmunidad celular,1 una de ellas es el test de pruebas cutáneas que evalúa la hipersensibilidad cutánea retardada debido a la respuesta producida por los linfocitos T, que al ser estimulados por la presencia de un antígeno específico, llevan a cabo esta respuesta alrededor del antígeno.2
Este test se realiza por multipuntura de diferentes antígenos que se infiere que han estado en contacto con elpaciente previamente, como son: Candida, Tricophyton, Clostridium tetani y Tuberculina.
Como mencionamos anteriormente uno de los antígenos utilizados para el test de pruebas cutáneas3 es el de la Candida la cual puede causar grandes infecciones en el hombre, como son las infecciones cutáneas de las mucosas intestinales y broncopulmonares,4 de ahí la importancia de su valoración.
El objetivo de estetrabajo lo constituyó la evaluación de un método de purificación del antígeno proteico deCandida albicans para el test de pruebas cutáneas, de forma tal que sea posible lograr la adecuada disminución de las reacciones adversas e interferencias, optimizándose la respuesta inmunológica durante el ensayo.
MATERIAL Y METODO
Se elaboraron 3 lotes experimentales según la metodología siguiente:
CultivoLa obtención de las masa celular se realizó a partir de un cultivo agitado de la cepa Candida albicans ATCC 10331 en medio Saboraud a una temperatura de 25 o C durante 7 días. Después de comprobar la pureza y viabilidad, el cultivo se centrifugó y el pellet se lavó con acetona; de esta forma se obtuvo la masa celular seca.5
Purificación
Se realizó una extracción con agua destilada a razón de 15mL/g de célula seca. Se agitó durante 3 h y se centrifugó a 12.000 g durante 20 min a 4 o C. El volumen de sobrenadante se concentró 3 veces con polietilenglicol G-4 000 al 21 % (P/V). A las muestras concentradas se le añadió sulfato de amonio al 100 % de saturación con el objetivo de precipitar la proteína.6 Se dejó reposar 16 h a 4 o C; una vez transcurrido este tiempo se centrifugó a...