digestion de proteinas

DIGESTION PROTEICA CON MICROONDAS Y SU APLICACIÓN EN PREPARACION DE MUESTRAS PARA ANALISIS DE HARINA DE PESCADO
CARLOS HERRERA *, MARIA TELLO, IGNACIO IBAÑEZ,
LUIS VELASQUEZ , MARCELO MANCINI Y SANDRA ALVAREZ
* Facultad de Ciencias, Universidad Católica de la Santísima Concepción,
Casilla 297, Concepción, Chile. Fax: (41) 735251. E-mail: cherrera@moises.ucsc.cl
Facultad de Química,Pontificia Universidad Católica de Chile, Casilla 306, Santiago, CHILE.
(Recibido: Marzo 6, 2001 - Aceptado: Octubre 25, 2001)
RESUMEN
La hidrólisis de albúmina (BSA), utilizada como una proteína modelo, en HCl 6N en el interior de una cápsula de teflón PFA con tapa atornillada, fue analizada a diferentes tiempos de calentamiento en un horno de microondas doméstico. Los tiempos de la reacción dehidrólisis de la proteína fueron seguidos, por cromatografía de filtración molecular, a través de la disminución de la absorbancia, medida en un monitor UV a 254 nm, del peak proteico y aumento de la correspondiente a aminoácidos libres (tirosina), en las muestras eluídas de una columna de Sephadex G-25. La hidrólisis completa de la proteína fue obtenida después de 30 minutos, cuando se utilizó lamitad de la potencia nominal del horno de microondas (aproximadamente 300W). El método fue aplicado satisfactoriamente a la hidrólisis de la proteína presente en harinas de pescado, como preparación previa de la muestra, para determinar posteriormente los aminoácidos básicos y aminas biógenas, por cromatografía de intercambio iónico, seguida de HPLC.
Palabras clave: Tratamiento, microondas,digestión, proteína, harina de pescado
ABSTRACT
Hydrolysis of albumin (BSA), as a model protein, in 6N HCl inside a PFA screw capped sample vial, was analysed at diferent times by heating in a household microwave oven. The protein hydrolisis reaction times were followed through molecular filtration chromatography, by measuring in a UV monitor at 254 nm, the decreasing in protein and increasing in freeamino acids (tyrosine) peak´s absorbances, of the samples eluted from a Sephadex G-25 column. The total hydrolysis of the protein was achieved after 30 minutes and at a half of the nominal power of the microwave oven (approx. 300 W). The method was succesfully applied to the hydrolysis of the protein present in fish meal, as previous preparation of the sample, for later determination of basicamino acids and biogenic amines, by ion exchange chromatography, followed by HPLC.
Keywords: Microwave, treatment, protein, digestion, fish meal,
INTRODUCCION
La digestión, junto a la disolución de las sustancias a ser analizadas, que se encuentran presentes en muestras, orgánicas o minerales, son procesos obligados en muchos laboratorios de análisis químico en todo el mundo, los que se realizan,para la posterior determinación de los analitos. Esta etapa previa es generalmente un paso limitante de los procesos de análisis, debido a que los tiempos de hidrólisis pueden ser demasiado largos, lo que incide en una demora en la entrega de los resultados, situación que es más evidente luego de los grandes avances tecnológicos actuales, en lo referente a velocidad de funcionamiento de la nuevainstrumentación analítica. Por otra parte la preparación de las muestras, es un proceso que tiene tanta incidencia como la calibración de los instrumentos, sobre la exactitud y precisión de los análisis 1 - 3).
Los tratamientos convencionales, generalmente significan calentamientos en medio ácido por períodos de tiempo bastante largos. En general este proceso se lleva a cabo con ácidos mineralesconcentrados, los que actúan más rápidamente a temperaturas y presiones elevadas 4).
El empleo de energía de microondas para la digestión ácida de materiales en sistemas cerrados a altas temperaturas y presiones, es una importante alternativa que ha demostrado reducir significativamente los tiempos de preparación previa de las muestras, para posteriormente determinar componentes orgánicos tales...