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Universidad Nacional del Nordeste FACULTAD DE AGROINDUSTRIAS Microbiología General- Carrera Farmacia

Trabajo Práctico Nº 5 Estudio cuantitativo de bacterias Año 2006

Trabajo Práctico Nº 5 Estudio cuantitativo de bacterias
RECUENTO DE COLONIAS EN PLACA Es un método muy utilizado cuando se necesita determinar el tamaño de la población bacteriana de una muestra. El recuento demicroorganismos, en este caso, se basa en que cada uno desarrollará una colonia visible. Pero debido a que una muestra no es totalmente homogénea con respecto a su composición microbiológica, es posible que una colonia se origine de un microorganismo o de cientos de ellos, dando en este último caso un recuento menor del real. También es posible que muchas de las bacterias presentes en la muestra no puedan creceren las condiciones elegidas (pH, temperatura, medio de cultivo, tiempo, etc.). En este caso el recuento también será inferior al real. Lo que si se sabe es que cada colonia observada se formó a partir de por lo menos un microorganismo. Esta es una condición necesaria y suficiente. Entonces la colonia es considera una unidad formadora de colonia (ufc) a los efectos de los cálculos. Se admite, porlo tanto, que en los métodos de recuento de microorganismos vivos, son inevitables los errores. Especialmente cuando se examinan muestras pequeñas, es posible cometer grandes errores. Técnica Operatoria Preparar una suspensión al 10 % de suelo en 50 ml. de agua destilada. La tierra debe estar seca y recién recogida. Mantener en agitación la suspensión anterior durante 30 a 60 minutos. Puedeutilizarse agitación manual o magnética. Preparar diluciones seriadas de 1/10, 1/ 100, 1/ 1.000, 1/ 10.000 y 1/ 100.000 de la suspensión anterior respetando un volumen final de 5 ml. Se rotulan 5 placas (una para cada dilución) sembrar 0.1 ml (con pipeta limpia en cada una) de cada dilución en una placa de Petri con Agar Nutritivo y con ayuda de una asa de Digralski extenderlo por toda la placa. Incubara 37 °C durante 2- 3 días en estufa o incubadora. Observar las placas en busca de efectos de inhibición. Realizar el recuento de los microorganismos presentes en la muestra del suelo. Para realizar el contaje se escogen las placas que muestren entre 30 y 300 colonias. Para visualizar mejor es conveniente ubicar la placa sobre una caja con tapa de vidrio y luz, dividiendo la superficie total de laplaca en sectores cuadriculados. Dar el resultado en ufc/g (no en bacterias por gramo): Ufc/g = N° de colonias en placa (entre 30 y 300) x inverso de la dilución x 10

López Tevez, Leonor; Torres, Carola

Universidad Nacional del Nordeste FACULTAD DE AGROINDUSTRIAS Microbiología General- Carrera Farmacia

Trabajo Práctico Nº 5 Estudio cuantitativo de bacterias Año 2006

ESTIMACION DELNUMERO MAS PROBABLE (NMP) Este método se basa en la presunción de que las bacterias se hallan uniformemente distribuidas en un medio líquido, o sea que las muestras del mismo tamaño de un mismo producto tendrían el mismo número de microorganismos. Naturalmente las muestras contienen algunos gérmenes más o menos. Entonces la cifra media es el número más probable. Las bacterias rara vez estánseparadas de sus vecinas. Ellas se agrupan en racimos, en especial cuando se reproducen activamente. Además la agitación puede deshacer o inducir a la formación de racimos. Por lo tanto carecen de valor las pruebas que se obtienen de una prueba aislada. Si el número de gérmenes es grande, la diferencia entre las muestras será pequeña, pero si es pequeño las diferencias relativamente serán mayores. Estatécnica se usa principalmente para la estimación de bacilos coliformes en caldo Mac Conkey, pero puede ser empleada para casi toda clase de gérmenes en muestras líquidas. Es posible calcular el número de gérmenes por cada 100 ml. con cualquier combinación de resultados obtenidos de tales muestras. Existen tablas para muestras de 10ml., 1ml. y 0,1 ml. utilizando cinco o tres tubos para cada tamaño...